1. Application of Directly Coupled HPLC- NMR-MS to the Identification and Confirmation of Quercetin Glycosides and Phloretin Glycosides in Apple Peel 분야 : HPLC-(NMR)-MS 발표자 : 석사 1 기 이 강진

2. 목 차 1. 기기 개요 2. Appele peel 의 성분 3. 분석조건 4. 분석결과 5. 고찰 6. 참고문헌

3. 가. 고전적 natural product 검색 방법 기기 개요 - I 1)Preparation of extracts 2)Test their pharmacological activity 3)Isolate individual components of the ext’s using liquid chromatography 4)Perform structure elucidation by NMR and MS off-line  Very tedious and time-consuming procedure

4. 나. 고전적 방법의 개선 노력 (On-line technique)  HPLC-UV detector - 물질의 분리와 검출에 일반적으로 사용 - polar, nonvolatile, unstable componets 에 적합 - 물질의 구조에 대한 data 제공에 부적함  HPLC-UV-MS - 분리된 물질의 분자량 추정 가능  HPLC-UV-NMR - nanogram range 에서도 분석 가능  HPLC-UV-NMR-MS - fast separation and structure elucidation 기기 개요 - Ⅱ

5. 다. 일반적 HPLC-NMR-MS 의 구조 기기 개요 - Ⅲ

6. 기기 개요 - Ⅳ 라. MS 의 구조

7. Apple peel 의 성분 - Ⅰ  대부분이 Falvonoids - quercetin O-glycosides (rutin, hyperin, isoquercetin, reynoutrin, avicularin, quercitrin) - phloretin O-glycosides (phloridzin)

8. Apple peel 의 성분 - Ⅱ  Mass spectral fragmentation pathway of flavonoids RDA (retro-Diels-Alder) cleavage

9. 분석 조건 - Ⅰ 가. Apple peel extrat 준비 2.5g apple peel + 12.5 mL MeOD/D 2 O ↓ 90 ℃ 에서 15 분간 추출 ↓ 원심분리 ( 10 min at 3,000g ) ↓ 감압농축하여 MeOD 에 녹임

10. 분석 조건 - Ⅱ 나. HPLC 조건 Column : Reverse phase C 18 column (250 X 4 mm, paricle size 5μm, Merck) Column temp. : 35 ℃ Flow rate : 1.0 mL/min Injection volumn : 100 ul Mobile phase : gradient between D 2 O(0.1% trifluoro acetic acid) and acetonitril Diode array detector : 280 nm (phloretin glycoside) 370 nm (quercetin glycoside)

11. 분석 조건 - Ⅲ 다. 1 H-NMR Detection 500 MHz Temperature : 30 ~ 37 ℃ 1D TOCSY (pulse program selmp, Bruker), 128 scans 라. MS Detection Scan range : 100 ~ 700 m/z

12. 분석 결과  HPLC-MS analysis of apple peel extract

13. 고찰 laboratory fractionation 및 purification 필요 없음 극미량 (a few microgram) 의 시료로도 성분의 분석과 구조 규명이 가능 실험 시간의 단축 및 보다 정확한 물질에 대한 정보 획득 가능 flavonoid algycone 및 그의 conjugates 동정에 꼭 필요한 방법

14. 참고 문헌 1. Lommen A.; Godejohann M.; Venema D.P; Hollman P.C.H.; Spraul M. Anal. Chem. 2000, 72, 1793-1797 2. Hollman P.C.H.; van Trijjp, J. M. P.; Buysman M.N.C.P.; van der Gaag, M.S.; Mengelers, M.J.B.; de Vries, J.H.M.; Katan, M.B. FEBS Lett. 1997, 418, 152-156 3. Suarez-Valles, B.; Santamaria-Victorero, J.; Mangas-Alonso, J.J.; Blanco-Gomis, D. J. Agric. Food Chem. 1995, 42, 2732-2736 4. Andrade, P.B.; Carvalho, A.R.F>; Seabra, R.M.; Ferreira, M.A J. Agric. Food Chem. 1998, 46, 968-972 5. Justesen, U.; Knouthsen, P.; Leth, T. J. Chromatogr. A 1998, 799, 101-110 6. Chaves, N.; Rios, J.J; Gutierrez, C.; J. Chromatogr. A 1998, 799, 111-115 7. Wilson, D>; Morgan, E.D>; Lafont, R.; Shocker, J.P; Lindon, J.C.; Nicholson, J.K>; Wright, B. Chromatophia 1999, 49, 374-378 8. Hansen, S.H.; Gemal Jensen, A.; cornett, C.; Bjornsdottir, I.; Taylor, S.; Wright, B.; Wilson, I.D. Anal. Chem. 1999, 71, 5235-5241 9. 분광학적 분석 입문 10. 기기분석, 대한교과서주식회사