1. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 学习和初步掌握油菜苗期菌核病抗性鉴定 技术方法。 一、目的

2. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 实验室苗期菌丝接种鉴定法方法简单易行， 鉴定周期短，不受自然环境影响，适于对大量材 料的筛选。 另据初步研究，苗期菌丝接种鉴定表现抗菌 材料，在花期仍表现抗病。 在本实验中只学习和掌握苗期菌丝块接种鉴 定法。 二、内容说明

3. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 （一） 用品 油菜不同品种种子（包括抗病品种如中油 821 ，感病品种如 84039 的种子）、生长室、平底 塑料盘（ 60×30×4cm ）、园土、绿高一号液（北 京北农绿高科技发展有限公司出产）、马铃薯、 纱布、葡萄糖、琼脂胶、试管、三角瓶、解剖刀 、接种环等。 三、所需用品和操作方法

4. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 （ 1 ）土壤准备：取较肥沃的菜园土，清除石块，晒干 敲碎，然后装入塑料盘中（需装满）。 （二）、主要作法－－ 1. 供试苗的种植

5. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 （ 2 ）油菜播种：保证出苗后能保留生长一致苗 30 株。 每 10 个品种设对照。 （二）、主要作法－－ 1. 供试苗的种植

6. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 （ 3 ）土壤消毒：播种后用 2000—3000 倍的绿亨一号溶 液浇透土壤进行消毒。 （二）、主要作法－－ 1. 供试苗的种植

7. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 （ 4 ）播后管理： 播后将塑料盘放于生长室内，在出苗期间，室内 温度控制在 20 ℃以下，在出真叶后，控制 20—24 ℃ 左右，每 2 天喷水一次。 （二）、主要作法－－ 1. 供试苗的种植

8. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 生 长 室

9. 生长室外管理

10. （ 1 ） PDA 培养基的制作： 取马铃薯 200g ，洗净去皮切碎，加水 1000mL ，煮沸 30min ，用纱布过滤，将滤液加水补足到 1000mL ，加葡萄糖 10—20g 和琼脂胶 17—20g ，加 热溶化，用纱布过滤。然后依需要，分别装入试管 （用作贮藏菌种），或装入培养皿（用作培养菌丝 接种菌），然后在高压灭菌锅内进行灭菌。 （二）、主要作法－－ 2. 菌丝的培养

11. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 （ 2 ）菌丝的培养： 取贮存平板菌核病的菌丝，在无菌条件下移下装 有 PDA 培养基的培养皿上，每皿一小块，放在培养 皿中间，在 22—25 ℃下培养 3—4 天，以菌丝长满， 而又没有结核为宜。 （二）、主要作法－－ 2. 菌丝的培养

12. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 （ 1 ）接种： 待油菜苗 3—5 片真叶时，将菌丝平板以无菌解 剖刀切成 0.5×0.5cm 小块，将有菌丝的一面贴于叶片 上（注意不要贴在叶脉上），每株接种 1 片叶，每 叶接种 1 小块。 见下图 （二）、主要作法－－ 3. 菌丝块的接种与管理

13. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定

14. （ 2 ）管理：接种后在 23—26 ℃温度和 85%—95% 相对 湿度下培养 5—7 天后即可调查（注意接种后前 2 天 相对湿度应保持 95% 以上，以确保发病，后 3—5 天 保持 85% 左右，使接种菌不致于腐烂）。 （二）、主要作法－－ 3. 菌丝块的接种与管理

15. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定

20. 在试验中当感病品种的发病率超过 40% 以上方为 有效鉴定。 一般将病害等级分为 5 个等级，即： 0 级：无病。 1 级：病斑面积占接种叶面积 10% 以下。 2 级：病斑面积占接种叶面积 10—30% 。 3 级：病斑面积占接种叶面积 30—50% 。 4 级：病斑面积占接种叶面积 50% 以上。 （二）、主要作法－－ 4. 病害等级调查

21. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 （ 1 ）计算发病率 （二）、主要作法－－ 5. 统计方法和抗性分级标准

22. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 （ 2 ）计算病情指数 式中： Gi 为病害级别； Ni 为调查株数； i 为 0 、 1 、 2…k,GK 为最高级别。 （二）、主要作法－－ 5. 统计方法和抗性分级标准

23. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 （ 3 ）计算相对抗性指数（ RRI ） 式中： m 为供试材料； CK 为对照。 RRI ，即 Relative resistant index （二）、主要作法－－ 5. 统计方法和抗性分级标准

24. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 （ 4 ）抗性分级标准： RRI ≤-1.2≤-0.7 <0≥0>0.9>2.0 抗性 分数 高抗中抗低抗低感中感高感 代号 HRMRLRLSMSHS （二）、主要作法－－ 5. 统计方法和抗性分级标准

25. 实验 15 油菜苗期菌核病抗性鉴定 1 、供试苗的种植、菌丝的培养和接种后管理中应如 何掌握好温湿度条件？ 2 、供试品种抗性属于哪个等级？ 3 、你认为这种接种鉴定方法有何优缺点？ 四、 作业