RT-PCR 扬州大学 生物科学与技术学院

背景介绍 DNA 存在于细胞核中并编码了基因 转录 : 双链 DNA 解链后利用其中一条链（编 码链）合成信使 RNA （ mRNA ） mRNA 从细胞核转移到细胞质中 mRNA 结合上核糖体开始翻译成蛋白质 蛋白执行基因的功能

从 DNA 转录成 mRNA

转录，复制和翻译

扬州大学生物科学与技术学院 生物化学精品课程 原理 利用逆转录酶能将 RNA 逆转录成 DNA 的特 性，通过合适的引物，将细胞内的 RNA （一般为 mRNA) 逆转录成 cDNA ， 然后，通过 PCR 技术，将痕量的 cDNA 扩增 成大量的双链 DNA 。 获得的 dsDNA 可通过测序获得目的基因， 也可用于基因操作。

RT － PCR 的步骤 : 从细胞中分离 mRNA 将 mRNA 逆转录成 cDNA 这个步骤与转录是相反的，因此叫逆转录 －逆转录酶来源于病毒 逆转录后，获得了一些微量的 cDNA, 这些 微量的 cDNA 还不足以用来测序。 因此，需要将这些微量的 cDNA 扩增足够的 拷贝才能用于序列测定或基因操作。

逆转录步骤 cDNA 链合成, 互补 mRNA 链，一般利用 polyT 作为引物 ，也可用特异性的序列作为引物 G U A A U C C U CAAAAAAAAAAAAAAA Reverse transcriptase mRNA cDNA T T A G G A G TTTTTTTTTTTTTTT 逆转录 polyT 引物

PCR 步骤

电泳分离不同大小的 DNA 片断

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