2. 第一节 DNA 的重组 DNA Recombination

3. DNA 重组包括： 同源重组 细菌的基因转移与重组 位点特异重组 转座重组 接合作用 转化作用 转导作用

4. 发生在同源序列间的重组称为同源重组 (homologous recombination) ，又称基本重组。 是最基本的 DNA 重组方式，通过链的断裂和 再连接，在两个 DNA 分子同源序列间进行单 链或双链片段的交换。 以 E.coli 的同源重组为例，了解同源 重组机制的 Holliday 模型。 一、同源重组

13. 受体

20. 四、转座重组 由插入序列和转座子介导的基因移 位或重排称为转座（ transposition ）。

25. 第二节 重组 DNA 技术 DNA Recombination Technique

26. 基因工程诞生的历史背景： 1973 年是基因工程诞生的元年。 1. 1944 年 Oswald T.Avery 等的肺炎球菌转化证明 了 DNA 是遗传信息携带者。 2. 1953 年 James Watson 和 Francis Crick 两人提出 了 DNA 结构的双螺旋模型，揭示了遗传物质自我复 制的机制。 3. 1961-1965 年, 科学家破译了生物界全部 64 个遗 传密码, 发表了划时代的遗传密码字典，提出了遗 传信息由 DNA→RNA→ 蛋白质传递的中心法则。 4. 1970 年发现了反转录酶，丰富了中心法则，为 cDNA 的制备奠定了基础。

27. 5. 染色体外 DNA---- 质粒的深入研究，为第一批 重组 DNA 载体提供了材料。 6. 1968-1970 年，限制性内切酶的发现和纯化， 为 DNA 的体外重组提供了有力的工具。 7. 1972 年， Berg.D 等人首次用限制性内切酶 EcoRI 切割噬菌体和 SV40 病毒 DNA 分子，将这两 种不同来源的 DNA 片段成功地在体外连接成杂合 DNA 分子。 至此，用重组 DNA 技术改变生物学性状的尝试 在 1973 年由 Cohen 等人完成。从此，这项技术为 生物学带来了一场深刻的革命，这类技术本身也 迅速地发展起来，并广泛地渗透到各个学科的研 究领域。

28. 一、重组 DNA 技术相关概念 （一） DNA 克隆 克隆（ clone ） 来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 获取同一拷贝的过程称为克隆化 （ cloning ）, 即 无性繁殖。

29. 技术水平： 分子克隆（ molecular clone ） 即 DNA 克隆 细胞克隆 个体克隆（动物或植物）

33. 内切核酸酶

34. ，维持细菌遗传性状的稳定。

36. 限制性内切核酸酶或 DNA 结合蛋白所 特异识别、结合的 DNA 位点的核苷酸序列， 呈二元旋转对称，通常将这种特殊的结构 顺序称为回文结构（ palindrome ）。 识别序列可以是四核苷酸、六核苷酸或 八核苷酸；产生的切口可以是粘性末端、 平头或钝性末端、配伍末端。 。 ５’５’ ５’５’ ３’３’ ３’３’

37. ５’５’ ５’５’ ５’５’ ５’５’ ５’５’ ５’５’ ５’５’ ５’５’ ３’３’ ３’３’ ３’３’ ３’３’ ３’３’ ３’３’ ３’３’ ３’３’

40. ( 三 ) 目的基因 目的基因：用来扩增作研究或生产某一 种蛋白质的基因。就是在重组 DNA 时，人 们感兴趣的基因或 DNA 序列，又称目的 DNA(target DNA) 。 类型： cDNA(complementary DNA) ：指经反转 录合成的、与 RNA 互补的单链 DNA ，经聚 合可合成双链 cDNA 。 基因组 DNA(genetic DNA) ：指代表一个 细胞或生物体整套遗传信息 ( 染色体及线粒 体 ) 的所有 DNA 序列。

41. 大容量载体 柯斯质粒载体 酵母人工染色体载体

63. 感受态细胞：指具备接受外源 DNA 能力的宿主细胞

72. （六）克隆基因的表达 表达体系的建立 表达载体的构建 受体细胞的建立 表达产物的分离纯化 １、原核表达体系 ２、真核表达体系

73. 第三节 重组ＤＮＡ技术与医学 的关系 （一）疾病基因的发现与克隆 （二）生物制药

77. （五）遗传病的预防 １、产前诊断 ２、携带者测试 ３、症候前诊断 ４、遗传病易感性预测