1. 課堂內容  蛋白質 (protein)  蛋白質純化 學生 : 陳建良 2004.11.02

2. The construction of cells  DNA or RNA  Protein  Carbohydrates  Lipid etc.

3. ˇ

5. Peptide bond

6. Isoelectric point of protein (PI) PI=(pK 1 +pK 2 ) / 2 pH < pI positive charge pH > pI negative charge

7. 蛋白質結構

9. Major biological functions of protein  Catalytic proteins: A+B C  Structural proteins  Transport proteins  Regulatory proteins  Protective proteins : antibodies enzyme

17. 蛋白質的沈澱作用  能使蛋白質發生沈澱作用的因素有： 酸 酸性試劑 單寧酸 重金屬離子（汞離子、鉛離子等） 咖啡因 嗎啡 中性鹽 有機溶媒 熱

18. 蛋白質的溶解度 1.pH 值：當 pH 值在其等電點（ pI ）時，溶解度 最小。 2. 鹽濃度：當在低濃度時，蛋白質的溶解度隨 著鹽濃度的增加而增加，稱為 Salting-in 。當 鹽濃度高至某一濃度時，蛋白質的溶解度隨 著鹽濃度的增加而減少，稱為 Salting-out 。 3. 溶媒的介電常數（ Dielectric contant ）：酒精、 丙酮的常數較水小，使蛋白質分子在此溶媒 中的斥力較小，溶解度較低。 4. 溫度：在一限定的溫度（約 0~40 ℃）下，大 部份的蛋白質溶解度隨溫度的上升而增加。

19. 蛋白質純化  鹽析 (salting out)  等電點沉澱 (Isoelectric focusing)  離子交換層析法 (ion exchange chromatography)  膠體過濾層析法 (gel filtration chromatography)  親合力層析法 (affinity chromatography)  透析 (dialysis)

23. 等電點沉澱 pH=PI 淨電荷為零, 溶解度最小 沉澱

24. Ion exchange chromatography R + A - + B - R + B - + A - 原理是依據物質 所帶陰陽離子的 不同。電荷不同 的物質，對管柱 上的離子交換劑 有不同的親和力， 改變沖洗液的離 子強度和 pH 值， 物質就能依次從 層析柱中分離出 來

25. Gel filtration chromatography

26. Affinity chromatography 利用生物專一性, 特定蛋白質 僅與特定受質 (substrate) 作結 合

27. Dialysis Cellophane nitrocellulose collodion