1. 實驗室：榮總教研部分生實驗室 指導教授：蘇宗笙
Construction of HBV expression plasmids with mutation in putative hnRNP A1 site(nt )
實驗室：榮總教研部分生實驗室
指導教授：蘇宗笙

2. 目的
HBV是個很小的病毒，但是卻可以製造很多種蛋白質，由學姐的論文已找出可能為HBV的ESE(exonic splicing enhancer)nt 和ESS(exonic splicing silencer)nt ，而最近的研究報告指出可能為hnRNP A1 site應在nt 稍後，和HIV比對後，估計應在nt ，故實驗目的在於驗證nt 是否為ESE或ESS。

3. 方法 改變nt243-248“tagaga“為互補序列“atctct“
QuickChange Site-Directed Mutagenesis
將做好的pSVHBV放入癌細胞後抽取生成的RNA
pHBV(19/1004)
pHBV(19/1004)∆ESE
pHBV(19/1004) ∆ESS ↓
pHBV(19/1004)c( )
pHBV(19/1004)∆ESEc( )
pHBV(19/1004) ∆ESSc( )
pSVHBVc( )
pSVHBV∆ESEc( )
pSVHBV∆ESSc( )

4. 實驗過程 製作大量plasmid以備用。 pSVHBV pHBV(-9/1004) pHBV(-9/1004)∆ESE
pHBV(-9/1004)∆ESS
依據QuickChange Site-Directed Mutagenesis步驟，用PCR製作plasmid，sequencing。
pHBV(-9/1004)c( )
pHBV(-9/1004)∆ESEc( )
pHBV(-9/1004)∆ESSc( )

5. ☼發現學姐先前製作的pHBV(-9/1004)∆ESS缺少了一base pair，故仍依QuickChange Site-Directed Mutagenesis製作新的pHBV(-9/1004)∆ESS。
以pSVHBV為vector，用enzyme SalI-9-PshAI498製作plasmid，sequencing。
pSVHBVc( )
pSVHBV∆ESEc( )
pSVHBV∆ESSc( )
☼原本enzyme用BsaBI528，但切不動，故改用PshAI498。
暑假結束，transfection之後的實驗由學長接著進行。

6. 心得 覺得榮總實驗室的氣氛很融洽，學長姐也很熱心的指導我做實驗。 做實驗前實驗步驟要先訂好，實驗的藥品要先計算好，以免造成不必要的浪費。
實驗設計需要對照組，且應考慮各個可能的狀況設計不同的對照組，實驗有問題時才能解決。
實驗因常需要等待，故在做實驗前應先做好時間的分配，以免要半夜做實驗。