1. Tools and Techniques for Studying Cells

2. Outlines Cell Culture Flow Cytometry Microscopy Centrifugation
Gel Electrophoresis
Blotting

3. مطالعه ی سلول ها سال 1655، رابرت هوک، اصطلاح سلول
مطالعه ی سلول ها در موجود زنده مشکل است، معمولا مطالعات سلولی- مولکولی بر روی سلول های جدا شده از جانداران صورت می گیرد.
کشت تک سلولی هایی مانند باکتری ها، قارچ ها و آغازیان راحت تر از کشت سلول های موجودات پرسلولی است.

4. الزامات کشت سلول های جانوری
باید شرایط حدالامکان شبیه به شرایط موجود زنده باشد
دما pH
غلظت یون ها
دسترسی به مواد مغذی ضروری
9 اسیدآمینه ضروری (phe, val, thr, trp, ile, met, leu, lys, his)
آنتی بیوتیک
اکثر سلول های جانوری تنها در حالتی که به یک سطح جامد چسبیده باشند رشد می کنند
vitamins, various salts, fatty acids, glucose
cysteine, tyrosine, and arginine, glutamine

5. کشت اولیه ی سلول
قطعات بافت تحت تاثر پروتئاز (مثل تریپسین یا کلاژناز) قرار داده می شوند.
سلول های جداشده سپس در ظرف های کشت سلولی که حاوی مواد و شرایط لازم جهت کشت هستند قرار داده می شوند.
معمولا فیبروبلاست ها از بقیه ی سلول ها سریع تر رشد می کنند.

6. مراحل کشت سلول های انسانی

7. رده های سلولی (Cell Lines)
سلول هایی که از برخی تومورها مشتق می شوند
رده ی سلولی هلا (Hela) اولین رده ی سلولی بود که ایجاد شد
این رده در سال 1952 از کارسینومای دهانه ی رحم گرفته شد
سلول های رده های نامیرا معمولا کروموزوم هایی با توالی DNA غیرنرمال دارند
کشت سلول ها به صورت دو بعدی و سه بعدی برای تقلید محیط واقعی

8. Flow Cytometry (فلوسایتومتری)
اندازه گیری ویژگی های سلول های در حال حرکت
اندازه گیری ویژگی های سلول ها و دسته بندی آنها

9. FACS

10. میکروسکوپ میکروسکوپ نوری: از نور مرئی برای مشاهده استفاده می شود
Bright-field microscopy
Dark-field microscopy
Phase-contrast microscopy
Fluorescence microscopy
میکروسکوپ الکترونی: از الکترون ها به جای نور مرئی استفاده می شود.
Transmission electron microscope (TEM)
Scanning Electron Microscopy (SEM)

11. A sense of scale between living cells and atoms

12. میکروسکوپی فلورسنت
یکی از بهترین و قویترین تکنیک ها برای تعیین موقعیت مولکول ها در سلول با استفاده از میکروسکوپ می باشد
از نور UV و رنگ فلورسنت استفاده می شود
Male Rat Kangaroo Kidney Epithelial Cells

13. میکروسکوپی الکترونی Transmission Electron Microscope (TEM)
طول موج کمتر الکترون ها رزولوشن بهتری از تصویر ایجاد می کند
حد رزولوشن به صورت تئوری 0/005 نانومتر است
رزولوشن موثر در مطالعات بیولوژیک حدود 0/1 نانومتر است که حداقل برابر بهتر از میکروسکوپ نوری می باشد
Transmission Electron Microscope (TEM)
Scanning Electron Microscopy (SEM)

14. The principal features of a light microscope and a transmission electron microscope.

15. A cell by TEM

17. Scanning Electron Microscopy (SEM)

18. Scanning Electron Microscopy (SEM)

19. Scanning Electron Microscopy (SEM)

20. سانتریفیوژ
دو ذره در یک محلول با چگالی متفاوت با سرعت های مختلفی ته نشین می شوند
از سانتریفیوژ برای دو هدف اصلی استفاده می شود
برای جدا کردن یک نوع ماده از انواع دیگر
برای اندازه گیری ویژگی های فیزیکی (مثل وزن مولکولی، چگالی و شکل) ماکرومولکول ها
ثابت ته نشینی، S، مقیاسی برای اندازه گیری سرعت ته نشینی است

21. انواع سانتریفیوژ ها

22. Centrifuges Rotors

23. سانتریفیوژ خون

24. الکتروفورز بر روی ژل
یک متد که بر اساس حرکت ذرات باردار در حضور جریان الکتریکی پایه گذاری شده است
برای جدا کردن و آنالیز ماکرومولکول ها (DNA، RNA و پروتئین ها)
سرعت حرکت ذرات به چه مواردی بستگی دارد؟
اندازه، شکل و بار ذره مورد نظر
ولتاژ اعمال شده

25. انواع ژل های الکتروفورز
آگارز
به آسانی تغییر شکل می دهد و کار با آن راحت است
به صورت افقی انجام می شود
قطعات DNA از 50 جفت باز تا چندین میلون جفت باز
پلی اکریل آمید
کار با آن نسبت به آگارز مشکل تر است
به صورت عمودی انجام می شود
قدرت تفکیک بهتری نسبت به آگارز دارد، در حد 1 جفت باز
because the gel setting is a physical rather than chemical change, acrylamide is a potent neurotoxin 

26. تانک الکتروفورز

27. Direction of Electrophoresis
Vertical Electrophoresis
Horizontal Electrophoresis

28. Direction of Electrophoresis
Vertical Electrophoresis
Horizontal Electrophoresis

29. Western blot for Proteins
بلاتینگ Blotting
تکنیک انتقال DNA، RNA یا پروتئین به یک غشای حامل
Southern blot for DNA
Northern blot for RNA
Western blot for Proteins
the British biologist Edwin Southern.

30. Blotting