1. 芳酸及其酯类 药物的分析 第七章 芳酸及其酯类 药物的分析 药物分析教研室 Analysis of Aromatic carboxylic acids & esters

2. Contents Chemical structure & feature 1 Identification 2 Detection of specific impurities 3Assay4

3. 第一节 结构与性质 特点  均有苯环、羧酸或其酯  水杨酸类和苯甲酸类结构中的羧基直接与苯环相连  除了酸性基团外，各自具有本身的官能团  分子中苯环、羧酸和取代基的相互影响，使芳酸的 酸性强度各有不同

4. 第一节 结构与性质 ( 一 ) 苯甲酸类 苯甲酸 ( benzoic acid ) 丙磺舒 ( probenecid ) 甲芬那酸 ( mefenamic acid ) 羟苯乙酯 (ethylparoben)

5. ( 二 ) 水杨酸类 第一节 结构与性质 水杨酸 SA (salicylic acid) 阿司匹林 ( aspirin) 对氨基水杨酸钠 (PAS-Na) 双水杨酯 salsalate 贝诺酯 (Benorilate)

6. ( 三 ) 其它芳酸类 氯贝丁酯 (clofibrate) 布洛芬 ( ibuprofen ) 第一节 结构与性质

7. 第二节 鉴 别 ( 一 ) 铁盐 紫堇色 赭色 ↓ 米黄色 ↓ pH5.0~6.0 T.S. FeCl 3 pH4~6 中性溶液

8. 第二节 鉴 别 布洛芬

9. 第二节 鉴 别 氯贝丁酯 Fe/3 紫色 羟肟酸铁配位化合物

10. 第二节 鉴 别 ( 二 ) 重氮化 - 偶合反应 贝诺酯 橙红色

11. ( 三 ) 氧化反应 第二节 鉴 别 甲芬那酸＋ H 2 SO 4 深蓝色 △ 黄色 黄色并产生绿色荧光 随即变为棕绿色 ( 四 ) 水解反应

12. 第二节 鉴 别 ( 五 ) 分解产物的反应 ( 六 ) UV

13. 第二节 鉴 别 ( 七 ) IR -COOH -OH -COOH Ph-C 邻位取代 Ph

14. 第二节 鉴 别 N-H O-H N-H Ph:C=C 芳胺 酚

15. 第三节 特殊杂质检查 一、阿司匹林生产工艺 ASA 副产物 SA  溶液澄清度  水杨酸  易碳化物  炽灼残渣  重金属

16. 第三节 特殊杂质检查 1. 溶液澄清度 (Na 2 CO 3 溶液 ) 醋酸苯酯 水杨酸苯酯 乙酰水杨酸 苯酯 阿司匹林样品 0.50g ，加温热至约 45°C 的碳酸钠试液 10ml 溶解后，溶液应该澄清。

17. 2. 水杨酸 第三节 特殊杂质检查 淡黄、红棕、深棕色

18. 二、对氨基水杨酸钠 第三节 特殊杂质检查 间氨基酚

19. 第三节 特殊杂质检查 1. 双相滴定法 (Ch.P) 样品 0.3g 合并乙醚液 无水乙醚 25ml 3次3次 水 10ml 甲基橙指示剂 HCl 滴定液 滴定 杂质 ·HCl 转溶入 H 2 O 相 消耗滴定液不得超过 0.30ml

20. 第三节 特殊杂质检查 2.HPLC 法 (USP) 色谱条件 色谱柱－ C18 ， (250mm×4.6mm ， 10μm) 流动相－ NaH 2 PO 4 (0.05M)-Na 2 HPO 4 (0.05M)-MeOH( 含氢氧化 四丁基胺 1.9g) （ 425:425:150 ） 检测波长－ 254nm 内标－磺胺 间氨基酚杂质限量 =10(C/W)(Ru/Rs)(%) C—— 标准对照液浓度 W——PAS-Na 含量 Ru—— 供试溶液中间氨基酚与磺胺峰相应值之比 Rs—— 标准溶液中间氨基酚与磺胺峰相应值之比 <0.25%

21. 第三节 特殊杂质检查 ① 样品中含有 -COOH ， -SO 3 H 基团时，选用的离子对 试剂应为带正电荷的有机胺盐 ② 除离子对试剂外，还需加入磷酸盐或其它缓冲液， 以控制流动相的酸度，使酸性官能团解离 ③ 样品中含有 -NH 2 ， -NH- 基团或其它阳离子时，应选 用烷基磺酸盐或硫酸盐作为离子化试剂 ④ 样品中若同时含有不同性质的基团时，则以上规则 选择的离子对试剂均为合理

22. 三、二氟尼柳 第三节 特殊杂质检查 供试品对照品 色谱柱： C18 流动相：水 - 甲醇 - 乙腈 - 冰醋酸 检测波长： 254nm 供试品溶液的色谱图中 如果有杂质，各杂质的 峰面积之和不得大于对 照溶液主峰面积。

23. 第三节 特殊杂质检查 四、甲芬那酸 铜盐 —— 原子吸收分光光度法 有关物质 ——HPLC 五、氯贝丁酯 对氯酚 ——GC 、 HPLC 挥发性杂质 ——GC

24. 第四节 含量测定 一、酸碱滴定法 (Acid-base titration method) 苯甲酸 pKa 4.20 水杨酸 pKa 2.98 酸性较强 羧酸邻位 -OH ，吸电子基团，使酸性增加； 分子内氢键，更增加了其极性 直接滴定 Aspirin 、丙磺舒 (Ch.P. BP. JP 等 ) 苯甲酸 (Ch.P 等 ) 均 采用本法

25. 第四节 含量测定 1. 直接滴定法 乙醇作用：溶解 ASA ；防止 ASA 在水溶 液中滴定过程易水解 中性乙醇：对指示剂 ( 酚酞 ) 而言为中性， 可消除滴定误差  pKa 3~6 的药物溶于中性醇, 可直接用 NaOH 滴定  pKa 6~9 的药物要用非水溶液滴定法  若 SA 不合格，不宜采用本法

26. 第四节 含量测定 2. 水解后剩余滴定法 ( Residual titration after hydrolysis ) 取本品约 1.5g ，精密称定，准确加 NaOH 液 (0.5mol/L)50.0ml ， 缓缓煮沸 10min ，放冷，以酚酞为指示剂，用 H 2 SO 4 液 (0.25mol/L) 滴定剩余的 NaOH ，并将滴定结果用空白试验校正。 每 1ml 的 NaOH 液 (0.5ml/L) 相当于 45.04mg 的 C 9 H 9 O 4

27. 第四节 含量测定 T 毫摩尔质量 0.5 规定的硫酸浓度为 0.25mol/L

28. 第四节 含量测定 3. 两步滴定法 ( Two-step titration ) Aspirin 片 枸橼酸 Citric acid 酒石酸 Trataric acid 水解产物 水杨酸 SA HAc 第一步： NaOH 滴定所有的酸： ASA ， CA ， TA ， SA ， HAc 第二步：水解后剩余滴定

29. 第四节 含量测定 取本品 10 片，精密称定，研细，精密称取适量 ( 约相当于阿司 匹林 0.3g) ，置锥形瓶中，加中性乙醇 ( 对酚酞指示剂显中 性 )20ml ，振摇使 ASA 溶解，加酚酞指示液 3 滴，滴加 NaOH 液 (0.1mol/L) 至显粉红色，再精密加 NaOH 液 (0.1mol/L)40ml ，置 水浴上加热 15min ，并时时振摇，迅速放冷至室温，用 H 2 SO 4 液 (0.05mol/L) 滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 的 NaOH 液 (0.1mol/L) 相当于 18.02mg 的 C 9 H 8 O 4

30. 第四节 含量测定 ☆计算：称取 10 片重 1.8240g 片粉重 0.5312g C NaOH ： 0.1032mol/L C 0.05120mol/L 标示量 0.1g V- 3.02ml V 0 - 20.18ml

31. 第四节 含量测定 二、亚硝酸钠滴定法 对氨基水杨酸钠

32. 第四节 含量测定 三、双相滴定法 (Titrimetry in two phases) 苯甲酸钠易溶于水 苯甲酸能溶 于有机溶剂 苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于水；苯甲酸不溶于 水，不利于终点的正确判断 因此，利用苯甲酸能溶 于有机溶剂的性质，采用双相滴定法 HCl 乙醚 ( 苯甲酸 ) H 2 O( 苯甲酸钠 ) 0.5mol/L 25ml1.5g 50ml ② 分出 H 2 O 层，置具塞 锥形瓶 ③ 乙醚层用 H 2 O 5ml 洗 涤，洗液并入锥形瓶 ④ 加乙醚 20ml ，继续用 HCl 滴定，至水层显持 续的橙红色

33. 第四节 含量测定 四、 UV 1. 直接 UV 法 2. 离子交换 -UV 法 氯贝丁酯在 226nm 的波长处有最大吸收，但对氯酚等 有关物质亦有吸收，干扰 UV 法的测定。根据氯贝丁 酯为酯结构，不能发生电离，而有关物质可发生酸性 解离的性质差异，采用阴离子交换色谱分离后，采用 UV 法测定。

34. 第四节 含量测定 3.CPC-UV 法 ( Column Partition Chromatography ) 利用固定相酸碱性的不同进行分离 利用药物和固定相起化学反应而进行分离 利用生成离子对进行层析分离 单纯靠选择流动相进行分离 200~300mm 60mm 4mm 22mm 层析柱层析柱 玻棉玻棉 压榨棒压榨棒 350mm 21mm 担体：硅藻土 (Celite 545) 固定相：一定 pH 的缓冲水溶 液 流动相：与水不相混溶的有机 溶剂 ( 洗脱前必须先用水饱和 )

35. 第四节 含量测定 a.SA 测定 玻棉玻棉 磷酸 - 硅藻土 FeCl 3 - 尿素 - 硅藻土 供试液制备 用 CHCl 3 50ml 洗涤，弃去 ( 洗去 ASA) 10ml 冰 HAc- 水饱和乙醚液 (1→10)( 使紫色配位化合物被分解， SA 析出 ) 洗脱液收集于已盛有 10ml 甲醇和 2 滴 HCl 的 50ml 量瓶中，继用 30mlCHCl 3 洗，并稀释至刻度

36. 第四节 含量测定 测定： 306nm 测定供试液和 SA 对照品液 A 供试液 ＜ A 对照品液 L= 75( µg/ml)×10ml 100mg×1000 ×100% ＝ 0.75% ① SA 与试剂生成紫色水杨酸铁配位化合物，在柱 上移动慢，带窄，色泽较深 ②若有 Fe 3+ 洗下，黄色影响测定结果 消除干扰方法：于底部拌有磷酸的硅藻土，生成 不溶解的 FePO4↓

37. 第四节 含量测定 b.ASA 测定 供试液制备 洗脱 5,25mlCHCl 3 ，弃去 CHCl 3 洗脱 10ml 冰 HAc-CHCl 3 (1→10)** ； 85ml 冰 HAc-CHCl 3 (1→100) ，并稀释至 100ml 测定： 280nm 空白： CHCl 3 ① NaHCO 3 使 ASA 和 SA 成盐保留于柱上 用 CHCl 3 洗脱的目的：去除中性或碱性杂质 ②冰 HAc 酸化的目的：使 ASA 游离，易被 CHCl 3 洗脱

38. 第四节 含量测定 五、 HPLC 第五节 体内药物分析