2. دکتر بهزاد اسفندیاری انستیتو پاستور ایران
Leptospirosis
دکتر بهزاد اسفندیاری
انستیتو پاستور ایران

3. مقدمه
مقدمه

4. مقدمه لپتوسپیروزیس (تب شالیزار یا تب برنجکاران)
شایعترین بیماری مشترک انسان و حیوان
مناطق گرمسیری، نیمه گرمسیری و معتدله
نواحی گرم و مرطوب
حاشیه دریای خزر، شرایط جلگه ای و آب و هوای معتدل و مرطوب
کشاورزان در منزل خود یک یا چند راس دام (به طور عمده گاو)، سک نگهبان و اسب
وﺿـﻌﯿﺖ ﻣﻨﺎﺳـﺒﯽ ﺑـﺮای اﺷﺎﻋﻪ ﻟﭙﺘﻮﺳﭙﯿﺮوز اﻧﺴﺎﻧﯽ

5. تاریخچه بیماری در جهان
Talmud، اولین گزارشات سندرم های دارای تب و یرقان
انجیل، اپیدمی های یرقان
اپیدمی های یرقان های عفونی در اسکندریه، قاهره، جزیره مالت، آتن، استانبول، قسطنطنیه، سوریه و بالکان
rice-field jaundice, mud fever, seven-day fever, rat fever
سال 1886 ، ویل، تظاهرات بالینی چهار بیمار
تب، یرقان و از کار افتادن کلیه ها، سندرم ویل
لپتوسپیروزیس = تب زرد، سال 1930 علائم بالینی تب زرد مشابه لپتوسپیروز

6. تاریخچه بیماری در ایران
اولین مطالعه در ایران، مقامی و همکاران، 1336
3000 راس گاو، گوسفند و 5 نفر شتر
روش MAT، موسسه رازی
31% آلودگی گاوها، 17% آلودگی گوسفندها
سروتیپ لپتوسپیرا گریپوتیفوزا و لپتوسپیرا ایکتروهموراژی
در مطالعه حسن پور در سال 1386
لپتوسپیرا اینتروگانس
گاوهاي شيري شهرستان تبريز، 229 نمونه سرمي
آزمـايش میکرو آگلوتينـاسيون

7. باکتری لپتوسپیرا باکتری لپتوسپیرا اسپیروکت
قطر باکتری 0/1 میکرون و طول بین 6-20 میکرون
در یک یا دو انتهای خود قلاب مشخص
دو فلاژل مسئول تحرک باکتری
خانواده لپتوسپیراسه
راسته اسپیروکتال
250 سرووار

8. طبقه بندی لپتوسپیرا لپتوسپیراهای پاتوژن به عنوان لپتوسپیرا اینتروگانس
ساپروفیت ها به عنوان لپتوسپیرا بایفلکسا
هر کدام از این دو گونه دارای چندین سرووار
امروزه برای رفع هر گونه سردرگمی، لپتوسپیراها به لپتوسپیرای پاتوژن (برای انسان) و غیرپاتوژن بدون اشاره به گونه یا سرووار آنها نامگذاری میشوند
پوشش خارجی لپتوسپیرا شبیه غشا خارجی باکتریهای گرم منفی است با این تفاوت که غشا خارجی لپتوسپیراها دارای محتویات لیپیدی بالا و تعداد پروتئین های نسبتا کمتری است

9. بیماری لپتوسپیروزیس
لپتوسپیروزیس یک بیماری سیستمیک انسان، حیوانات اهلی (بیشتر سگها)، گاو و خوک
نشانه بارز آن تب، از کار افتادگی کلیه و کبد، درگیری ریه و سیستم تولید مثل
حیوانات بعد از بهبودی به صورت ناقلین بدون علامت
مخازن: موش، اسب، سگ، گاو، خوک و ...
موشها مخزن سرووار ایکتروهموراژی
رت ها مخزن سرووار کپنهاگنی
انتقال انسان به انسان نادر
انتقال جفتی بین مادر و جنین

10. بیماری لپتوسپیروزیس علائم لپتوسپیروزیس:
سردرد، تب°C 39، درد عضلانی، بیقراری، زرد شدن سفیدی چشم
لپتوسپیروزیس حاد شدید سرووارهای ایکتروهموراژیه، کوپنهاگنی و لائی و ...
منابع عفونت اغلب راتها یا دیگر جوندگان

12. مراحل بيماري لپتوسپيروز، بيماري دو مرحله اي است:
سپتي سمي بيماري، لپتوسپيرا در خون، لنف، CSF
در لوله هاي خميده کليه و ادرار و از خون وCSF پاک مي شود
مرگ و مير بيشتر به علت نارسايي کليه و خونريزي
لپتوسپیراها از طریق بریدگی یا خراشهای کوچک جدید پوست و غشاهای مخاطی وارد بدن می­شوند

13. اپیدمیولوژی لپتوسپیرا
بهترین شرایط رشد و بقای لپتوسپیرا دمای درجه سانتی گراد
pH قلیایی
بیماری جز بیماریهای شغلی
کشاورزان، شالیکاران، کارگران، معادن، دامداران، دامپزشکان و کارکنان کشتارگاهها که با ادرار و خون حیوانات کشته شده در تماس
بیماری در مناطق روستایی بیشتر از مناطق شهری
در جنس مرد و زن
در تمام سنین

15. آزمون آگلوتیناسیون میکروسکوپی (MAT)
الایزا (ELISA)
آزمون آگلوتیناسیون میکروسکوپی (MAT)
تشخیصهای سرولوژیک
آگلوتیناسیون ماکروسکوپی
هماگلوتیناسیون، فیکساسیون کمپلمان و ...

16. واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) واکنش زنجیره ای پلیمراز (Nested-PCR)
روش های تشخیص مولکولی
واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR)
واکنش زنجیره ای پلیمراز (Nested-PCR)

17. نمونه ادرار
چون لپتوسپیراها در ادرار سریعا از بین می روند انتقال به آزمایشگاه نباید بیشتر از 1 ساعت به طول انجامد
گرفتن ادرار کاملا استریل
استفاده از فیلتر سر سرنگی 0/45 میکرون جهت ریختن ادرار به داخل محیط کشت (EMJH) Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris 
انتقال ظرف محیط کشت حاوی نمونه ادرار داخل انکوباتور 28 درجه سانتیگراد

18. نمونه خون 5 میلی لیتر خون گرفته خواهد شد
جداسازی سرم برای آزمون آگلوتیناسیون میکروسکوپی
نمونه ها را ﺳﺎﻧﺘﺮﯾﻔﯿﻮژ نموده، تا ﺳﺮم آﻧﻬـﺎ ﺟـﺪا ﺷـود و در ﻓﺮﯾـﺰر در دﻣـﺎی ﻣﻨﻬﺎی 20- درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﯽﮔﺮاد ﺗﺎ زﻣﺎن آزﻣﺎﯾﺶ MAT ﻧﮕﻪداری خواهند شد.

19. کشت میکروبی ادرار را در محیط باکتریایی مناسب کشت خواهیم داد.
بهترین محیط کشت لپتوسپیروز جهت انجام کار، محيط اختصاصي EMJH  است كه به صورت تجاري توسط شركت ديفكو تهيه و توزيع مي گردد استفاده شد.
کشتها در روزهای 4 و 10 در دمای 30 درجه سانتیگراد مورد بررسی قرار خواهند گرفت. برای محدود کردن رشد باکتریها هرگاه تراکم باکتری به 168 × 4-2 لپتوسپیرا در میلی لیتر رسید آن را در تاریکی و دمای اتاق نگهداری مینماییم.

22. بررسی با میکروسکوپ زمینه تاریک
برای مشاهده لپتوسپیرا در کشت، و نیز برای مشاهده بهتر و دقیق تر آگلوتیناسیون در آزمایش آزمون میکروسکوپی آگلوتیناسیون (MAT) استفاده می شود.

23. آزمون میکروسکوپی آگلوتیناسیون (MAT)
در این آزمون، نمونه های سرم که در لوله غیر هپارینه جمع آوری میشود مورد بررسی قرار خواهد گرفت که با استفاده از 20 سویه لپتوسپیرای زنده (بعنوان آنتی ژن) انجام می شود.
استرین ها متعلق به سرو گروه های زیر هستند:
Australis (strain Jez Bratislava), Autumnalis (Akiyami A), Ballum (Mus 127), Bataviae (Swart), Canicola (Hond Utrecht IV), Icterohaemorrhagiae (RGA), Grippotyphosa (Moskova V), Hebdomadis (Hebdomadis), Javanica (Poi), Pomona (Pomona), Pyrogenes (Pyrogenes), and Semaranga (Patoc I).
همه استرین ها در محیط EMJH به طور مرتب ساب کالچر دوره ای حفظ خواهند شد. Periodical subculture

24. تفسیر نتایج MAT
در این مرحله از روش غربالگری به صورت زیر استفاده خواهد شد:
غیرفعال کردن کمپلمان
رقیق کردن سرم به میزان 25/1 در سرم فیزیولوژی
مواجه آنتی ژن با سرم در رقتهای مختلف: لپتوسپیراهای آگلوتینه شده تشکیل خوشه هایی را می دهند که متراکم بوده و در اطراف آنها انتهای آزاد ارگانیسم دارای حرکت است. وقتی آگلوتیناسیون کامل باشد میدان دید میکروسکوپی خالی از لپتوسپیرای آزاد است. در عمل تفسیر نتایج به شرح زیر می باشد:
اگر نسبت لپتوسپیرای آزادبیش از 50درصد باشد واکنش منفی است.
اگر نسبت لپتوسپیرای آزاد کمتر از 50 درصد باشد واکنش مثبت است.

27. نتایج کشت میکروبی
کشت ها از روز چهارم تا 10 الی 15 روز از نظر وجود کلنی مشکوک به لپتوسپیرا مورد بررسی قرار میگیرند.
لازم به ذکر است که هر چند روز یکبار (10 الی 14 روز) از کشت های قبلی لام گرفته خواهد شد و توسط میکروسکوپ زمینه تاریک حضور یا عدم حضور باکتری مورد تائید قرار خواهد گرفت و سپس از همان کشت ها مجددا کشت های جدید داده می شود و در انکوباتور قرار داده می شود و دوباره مورد بررسی قرار خواهند گرفت.

28. پیشنهادات کاهش تماس مستقیم با حیوانات آلوده
کاهش تماس غیر مستقیم با آب شیرین خاک و گل حاوی ادرار حیوانات آلوده
رعایت موازین بهداشتی در کشتارگاه ها، مزارع و فروشگاه ها
پوشیدن چکمه های لاستیکی بلند و دستکشهای محافظ برای افرادی که مشاغل پرخطر دارند از قبیل کارگران فاضلاب و شالیکاران
کنترل جمعیت جوندگان
آلودگی زدایی آبهای شیرین
مصون سازی حیوانات با واکسن
درمان بیماران با پنی سیلین ها و تتراسیکلین‌ها

29. از توجه شما سپاسگزارم
از توجه شما سپاسگزارم